復(fù)雜植物總RNA提取試劑說(shuō)明書(shū)
RNApurePlantPlusReagent
復(fù)雜植物總RNA提取試劑
Cat.No. K0537
保存： 2-8℃
組分說(shuō)明
Cat.No. K0537 K0537A
復(fù)雜植物總RNA 提取試劑 16ml 80ml
產(chǎn)品簡(jiǎn)介
本試劑可從植物組織、特別是富含多酚或淀粉的植物組織（如甘蔗、馬鈴薯塊莖、松針、蘋(píng)果、香蕉、山藥等）中，提取總RNA，操作方便、快捷。每 100ml（加入β-巰基乙醇后的終體積）可處理 100mg 組織 200 次，處理 5g 組織 4次。由本試劑提取的 RNA 純度高，可直接應(yīng)用于下游實(shí)驗(yàn)，如 cDNA 合成、RT-PCR、Real-timeRT-PCR、NorthernBlot、
DotBlot、體外翻譯等。
注意事項(xiàng)
1. 預(yù)防RNase污染，應(yīng)注意以下幾方面：
1）使用無(wú)RNase的塑料制品和槍頭，避免交叉污染。
2）玻璃器皿應(yīng)在使用前于180℃高溫下干烤4小時(shí)，塑料器皿可在0.5MNaOH中浸泡10分鐘，用水*沖洗后高壓滅菌。
3）配制溶液應(yīng)使用無(wú)RNase的水。
4）操作人員戴一次性口罩和手套，實(shí)驗(yàn)過(guò)程中要勤換手套。
2. 提取的樣品避免反復(fù)凍融，否則影響RNA提取得率和質(zhì)量。
3. 復(fù)雜植物總RNA提取試劑在使用前請(qǐng)加入β-巰基乙醇，將β-巰基乙醇與復(fù)雜植物總RNA提取試劑以1:4的體積混合，加 入β-巰基乙醇后的復(fù)雜植物總RNA提取試劑可在4℃保存1個(gè)月。
4. 本品中含有苯酚，具有毒性和腐蝕性。如果吸入體內(nèi)、接觸皮膚、吞食等會(huì)導(dǎo)致中毒、灼傷以及其他身體傷害。使用本制品時(shí)應(yīng)穿戴防護(hù)物品，如防護(hù)服裝、手套、眼罩、面罩等。如果不小心接觸到眼睛，應(yīng)立即用大量的水沖洗并前往醫(yī)院治療。
5. 保存在 75%乙醇中的 RNA 沉淀，2-8℃可以保存一周，-20℃條件下可以保存 1 年。RNA 半衰期比較短，容易降解，
建議提取后盡快進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)，如反轉(zhuǎn)錄成 cDNA，NorthernBlot 等。
6. 若下游實(shí)驗(yàn)對(duì) DNA 非常敏感，建議用不含 RNase 的 DNaseI（貨號(hào)：K2090）對(duì) RNA 進(jìn)行處理。
自備試劑：β-巰基乙醇、5MNaCl、氯仿、異丙醇、75%乙醇、無(wú)RNase的水
操作步驟
小量樣本提取步驟：
1. 取不多于100mg的新鮮植物組織在液氮中充分研磨，將研磨后的粉末收集到離心管（自備）中。
2. 加入500 μl 復(fù)雜植物總RNA抽提試劑（使用前檢查是否加入β-巰基乙醇，β-巰基乙醇與復(fù)雜植物總RNA提取試劑以1:4的體積混合），反復(fù)吹打幾次，使樣本充分裂解。室溫放置5分鐘，使蛋白核酸復(fù)合物*分離。
3. 4℃ 12,000rpm離心1分鐘，將上清轉(zhuǎn)移到一個(gè)新的RNase-Free離心管（自備）中。
4. 在得到的水相溶液中加入100μl5MNaCl，混勻。
5. 加入300μl 氯仿，上下顛倒充分混勻。
6. 4℃ 12,000rpm離心10分鐘，將上清轉(zhuǎn)移到一個(gè)新的RNase-Free離心管（自備）中。注意：若提取的植物組織中富含多糖多酚，可重復(fù)步驟5、6一次。
7. 加入等體積的異丙醇，混勻，室溫放置10分鐘。
8. 4℃ 12,000rpm離心10分鐘，小心吸棄上清，注意不要吸棄RNA沉淀。
9. 加入1ml75%乙醇，4℃ 5,000rpm離心3分鐘，小心吸棄上清，注意不要吸棄沉淀。
注意：剩余的少量液體可短暫離心，然后用槍頭吸出，注意不要吸棄沉淀。
10. 室溫放置2-3分鐘，晾干。加入30-50μl 無(wú)RNase的水，充分溶解RNA，得到的RNA保存在-70℃，防止降解。
注意：沉淀不要過(guò)分干燥，以免難于溶解。
大量樣本提取步驟：
1. 取1g的新鮮植物組織在液氮中充分研磨，將研磨后的粉末收集到離心管（自備）中。
2. 加入5ml 復(fù)雜植物總RNA抽提試劑（使用前檢查是否加入β-巰基乙醇，β-巰基乙醇與復(fù)雜植物總RNA提取試劑以1:4的體積混合），反復(fù)吹打幾次，使樣本充分裂解。室溫放置5分鐘，使蛋白核酸復(fù)合物*分離。
3. 4℃ 10,000rpm離心1分鐘，將上清轉(zhuǎn)移到一個(gè)新的RNase-Free離心管（自備）中。
4. 每10ml 上清水相溶液中加入2ml5MNaCl，混勻。
5. 每10ml 上清水相溶液中加入6ml 氯仿，上下顛倒混勻。
6. 4℃ 10,000rpm離心15分鐘，將上清轉(zhuǎn)移到一個(gè)新的RNase-Free離心管（自備）中。
注意：若提取的植物組織中富含多糖多酚，可重復(fù)步驟5、6一次。
7. 加入0.9倍體積的異丙醇，混勻，室溫放置10分鐘。
8. 4℃ 10,000rpm離心15分鐘，小心吸棄上清，注意不要吸棄RNA沉淀。
9. 加入5-10ml75%乙醇，4℃ 5,000rpm離心5分鐘，小心吸棄上清，注意不要吸棄沉淀。
注意：剩余的少量液體可短暫離心，然后用槍頭吸出，注意不要吸棄沉淀。
10. 室溫放置2-3分鐘，晾干。加入200μl 無(wú)RNase的水，充分溶解RNA，得到的RNA保存在-70℃，防止降解。
注意：沉淀不要過(guò)分干燥，以免難于溶解。
實(shí)驗(yàn)代做服務(wù)：
| 實(shí)驗(yàn)室代做實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目
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| 染色質(zhì)免疫沉淀分析(CLIP)實(shí)驗(yàn)服務(wù)
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