ELISA法
光度酶聯(lián)免疫分析常被稱為ELISA法，即酶聯(lián)免疫吸附分析。它zui早由Engvall和Perlmann與Van Weeman和Schuurs同時(shí)建立，并用于醫(yī)學(xué)研究。它利用酶標(biāo)記物同抗原抗體復(fù)合物的免疫反應(yīng)與酶的催化放大作用相結(jié)合，既保持了酶催化反應(yīng)的敏感性，又保持了抗原抗體反應(yīng)的特異性，因而極大地提高了靈敏度。同時(shí)它又是一種非均相分析，即在反應(yīng)中的每一步都有洗滌過程，從而除去了未反應(yīng)物質(zhì)和干擾物質(zhì)。
ELISA是將抗原、抗體的免疫反應(yīng)和酶的催化反應(yīng)有機(jī)結(jié)合而發(fā)展起來的一種綜合性技術(shù)。它的基本原理是：使抗原或抗體結(jié)合到某種固相載體表面，并保持其免疫活性；抗原或抗體與某種酶聯(lián)結(jié)成美標(biāo)抗原或抗體，這種酶標(biāo)抗原或抗體即保留其免疫活性，又保留酶的活性。在測(cè)定時(shí)，使受檢標(biāo)本和酶標(biāo)抗原或抗體按不同的步驟與固相載體表面的抗原或抗體起反應(yīng)。用洗滌的方法使固相載體上形成的抗原抗體復(fù)合物與其他物質(zhì)分開，zui后結(jié)合在固相載體上的酶量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量成一定的比例。加入酶反應(yīng)的底物后，底物被酶催化變?yōu)橛猩a(chǎn)物，產(chǎn)物的量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量直接相關(guān)，故可根據(jù)顏色產(chǎn)反應(yīng)的深淺進(jìn)行定性分析或定量分析。由于酶的催化效率很高，往往一分子酶在1min內(nèi)可催化數(shù)十萬及至上千萬分子底物變?yōu)楫a(chǎn)物，故可極大地放大反應(yīng)信號(hào)，從而使測(cè)定方法達(dá)到很高的靈敏度。從以上的原理可知，整個(gè)ELISA試驗(yàn)可分為三個(gè)部分：一是免疫學(xué)反應(yīng)過程，包括抗原、抗體、酶標(biāo)記物之間的反應(yīng)；二是酶和底物反應(yīng)過程，可以使用不同的酶/底物系統(tǒng)；三是檢測(cè)方法的建立，可以利用已經(jīng)存在的各種分析手段，對(duì)酶催化反應(yīng)產(chǎn)生的產(chǎn)物進(jìn)行定量分析，根據(jù)產(chǎn)物的理化性質(zhì)，可采用分光光度法，也可采用熒光分析法、化學(xué)發(fā)光分析法、電化學(xué)分析法等分析方法。
N-US>?pn?? ?? yle='font-family:宋體;mso-ascii-font-family:"Times New Roman"; mso-hansi-font-family:"Times New Roman"'>或”酶標(biāo)定量測(cè)試儀”,其實(shí)這是不確切的,因?yàn)樵趯W(xué)術(shù)上”酶標(biāo)”是指用一定的方式,使酶與抗體(或抗原)蛋白質(zhì)結(jié)合的過程.
一,ELISA測(cè)試儀的使用方法:應(yīng)將ELISA測(cè)試儀安裝于溫度,濕度相對(duì)穩(wěn)定的干燥,清潔,安靜的實(shí)驗(yàn)室里,電源電壓可用交流電.使用時(shí)分校正儀器,測(cè)試樣品,清洗比色皿三個(gè)環(huán)節(jié).
校正儀器:1,關(guān)上光門,插入所需之濾光片,并將量程選擇開關(guān)轉(zhuǎn)到T”100%”處.2,接通電源,可見指示燈亮.3,預(yù)熱15min以上.4,將儀器由調(diào)”0”開關(guān)調(diào)到表頭指針為0.5,注入對(duì)照液,打開光門,調(diào)光量旋鈕使表頭指針為100%滿度.6,將量程轉(zhuǎn)到所需的A(光密度)量程范圍,用A旋鈕調(diào)至0.
測(cè)定樣品:1,安上抽液泵按鈕,抽去對(duì)照液.2,放下按鈕開關(guān),用微量移液管(又叫微量液體取樣器)注入樣品,即可讀數(shù),樣品測(cè)試程序由稀到濃.
清洗比色皿:開啟抽液泵,清洗比色皿3次以上,才可測(cè)試不同組分的樣品
二,與ELISA測(cè)試儀測(cè)定有關(guān)的輔助用具:ELISA測(cè)定中,其他有關(guān)的輔助用具有聚苯一乙烯塑料微量反應(yīng)板和微量液體取樣器.20世紀(jì)80年代,聚苯乙烯塑料微量反應(yīng)板由上海塑料制品三廠生產(chǎn),不同體積量的微量液體取樣器,由上海求精玻璃儀器廠等廠家生產(chǎn).聚苯乙烯塑料微量反應(yīng)板質(zhì)量與ELISA測(cè)試結(jié)果關(guān)系很大,尤其在使用四川第九儀表廠生產(chǎn)的ELISA測(cè)試儀時(shí)更為突出.
21世紀(jì)隨著科學(xué)技術(shù)的飛躍發(fā)展,ELISA測(cè)試儀的性能和外觀都發(fā)生了較大的變化.
